|
Conference publicationsAbstractsXV conferenceСравнительный анализ первичной структуры липаз семейства Mucoraceae394006 г. Воронеж, Университетская пл. 1 1 pp.Выполнен сравнительный анализ первичных структур липаз семейства Мucoraceae (Rhizomucor miehei, Rhizopus niveus, Rhizopus arrhizus, Rhizopus oryzae). Показано, что степень их гомологии составляет 61.7%. В состав консервативных областей аминокислотных последовательностей рассматриваемых липаз входят следующие компоненты: остатки Ser, выполняющие в каталитической триаде функцию связывания фермента с субстратом; Leu, являющийся составным элементом оксианионной щели (наряду с Thr, располагающимся у большинства плесневых эстераз у основания домена-«крышки»), остатки аспарагиновой кислоты и гистидина, осуществляющие разрыв сложноэфирных связей в молекулах триглицеридов. Показано, что 6 остатков цистеина, участвующие в образовании дисульфидных мостиков, занимают фиксированные позиции, а для трех липаз рода Rhizopus входят в состав гомологичных участков цепи. При исследовании структуры липазы с помощью программы MolScript v.2.1 установлено, что для каждой субъединицы фермента характерно наличие 7 спиралей, 9 β-тяжей и 15 аморфных участков. Данный фермент относится к α/β-белкам: ~28% остатков содержится в спиральных участках и 24% в β-тяжах. Анализ экспериментальных данных по химической инактивации липазы фенилметилсульфонилфторидом, исследование стехиометрии реакции ингибирования позволили сделать заключение о наличии в активном центре липазы одной ОН- группы Ser. При изучении четвертичной структуры липазы из R. japonicus методом гель-хроматографии показано, что молекула фермента представляет собой сложный олигомерный белок, состоящий из двух симметричных субъединиц с молекулярными массами 46 кДа, обладающих каталитической активностью. Таким образом, компьютерное моделирование структуры сложных олигомерных ферментов в сочетании с методами ИК-спектрофотометрии, энзиматических методов анализа, ионообменной и гель-хроматографии позволяет дать более корректную трактовку результатов исследования структурно-функциональных свойств гидролаз и способствует выявлению молекулярных механизмов реакции гидролиза полисахаридов. |
