|
Conference publicationsAbstractsXVII conferenceAssess of injuring totipotent cells of poikiloterm animals at freezingInstituteof ctll biophysics RAN,Russia,142290,Pushchino,Institutskaja,3,emelnikova@icb.psn.ru 1 pp. (accepted)Замораживание тотипотентных клеток и ранних зародышей холоднокровных для решения задач криоконсервации требует оценки сохранения жизнеспособности этих клеток на различных этапах данного процесса. Возможность получить оценку сохранения целостности мембраны клетки и оболочки зародыша, активности их эстераз и состояния хроматина клеток зародышей in vivo и in vitro дает использование флуоресцентных красителей - АНС, ФДА, ДАПИ, ЭБ и Hoechst.
В данной работе методом последовательного флуорохромирования АНС(313 Д) и ФДА(413Д) было исследовано состояние зародышевых клеток травяной лягушки Rana temporaria in vitro. Показано, что этот метод дает возможность проследить динамику состояния барьерной функции клеток и степень сохранения эстеразной активности их цитоплазмы при замораживании-оттаивании. Далее мы исследовали состояние тех же зародышевых клеток in vivo в процессе повышения проницаемости зародышевых оболочек ультразвуком. Результаты показали, что при щадящем действии ультразвука дегидрогеназная активность тотипотентных клеток в зародыше сохраняется.
Проведенные исследования показывают, что метод двойного флуорохромирования достаточно эффективен для оценки состояния тотипотентных клеток и выбора условий их замораживания-оттаивания, а полученные оценки повреждений могут быть полезными для моделирования процессов, протекающих в клетке при замораживании. |
