|
Архив публикацийТезисыXXV-ая конференцияМетодические приемы усиления ответов экспериментальных биообъектов in vitro при воздействии биологически активных веществИнститут Биохимической физики РАН им. Н.М. Эмануэля. Россия, 119334, Москва, ул. Косыгина д. 4, (495)939-74-09, факс (499)137-41-01, olgavek@yandex.ru 1 стр. (принято к публикации)Известно, что физиологически адекватные ответы биологических структур животного происхождения при воздействии биологически активных веществ (БАВ) во многих случаях недоступны для регистрации в связи с незначительным изменением параметров экспериментального объекта. Поэтому при работе in vitro с модельными биообъектами были подобраны условия для усиления ответа экспериментального биообъекта для получения регистрируемого результата. В качестве БАВ применяли синтетическое вещество мелафен (меламин бисфосфиновая кислота) - регулятор роста растений, и природный метилксантин кофеин. Как модельные объекты использовали липидные и белок-липидные мембраны, органеллы и клетки. Изучение влияния мелафена на структурные свойства биомембран было проведено с помощью подходов, направленных на усиление чувствительности экспериментальных биообъектов к воздействию. Влияние мелафена на структуру мембраны тестировали с помощью дифференциальной сканирующей микрокалориметрии (ДСК). Липид-липидные взаимодействия под влиянием мелафена регистрировали при плавлении мультиламмелярных липосом из димиристоилфосфатидилхолина (ДМФХ). Варьирование скорости подачи тепла к образцам позволило усилить и выявить эффекты мелафена на перестройку микродоменной организации липидов в бислое. Действие мелафена на белок-белковые взаимодействия регистрировали на свежевыделенных и состаренных мембранах теней эритроцитов. При старении взаимосвязи компонентов цитоскелета ослабляются, и проявление эффектов действующего вещества усиливается. Для мелафена не выявлено деструктурирующего действия в белковых микродоменах теней. Влияние мелафена на целых клетках - эритроцитах тестировали, регистрируя спонтанный гемолиз и гемолиз при экстремальных условиях – в гипо- и гипертонических средах спектральным методом. Другой подход позволил зарегистрировать влияние кофеина, на активность Са2+-насоса - АТФ-азы, и Са2+-канала в органеллах - фрагментах саркоплазматического ретикулума (СР). Функциональные свойства органелл тестировали потенциометрически при гидролизе АТФ. Методический прием заключался в увеличении кальций аккумулирующей способности СР. Краткосрочное старение органелл повышает проницаемость бислоя для анионов оксалата. Оксалат проникает в люмен СР и связывает Са2+. Постоянно снижая концентрацию свободного Са2+ внутри СР, оксалат повышает способность поглощать Са2+, активируя АТФ-азу значительно выше физиологических значений. Результаты указывают на то, что структурные и функциональные свойства биообъектов меняются in vitro при исследовании действия БАВ в специальных методических условиях для получения регистрируемых ответов. |
